Гормоны роста в кормах для рыбы

Гормоны роста в кормах для рыбы thumbnail

Лекарственные средства, содержащие биологически активные вещества – гормоны или синтетические препараты для рыб, обладающие физиологической активностью гормонов. В химическом отношении представляют собой белки, полипептиды, аминокислоты, гликопротеиды и стероиды. В крови животных они циркулируют в свободном или связанном состоянии и, подвергаясь изменениям в процессе обмена веществ, образуют метаболиты, ряд из которых также биологически активные вещества. В последние годы очень интенсивно ведутся исследования по стимуляции роста рыб с помощью гормональных препаратов.

Используют три группы гормонов для рыб: анаболические стероиды, соматотропные гормоны (млекопитающих и рыб) и тероидные гормоны.

Гормон из экстракта растений.

Стероид обладает анаболическим действием. Получают из экстракта тканей растения серпуха (Serratula inermis). Гормон под названием «экдистен» разрешен к применению в медицинской практике и используется как тонизирующее средство. Его преимущества для рыб по сравнению с другими гормональными препаратами: он не является эндогенным; не обладает побочным действием; не загрязняет среду обитания и рыбу, будучи применяемым в микродозах. Обладает хорошим ростостимулирующим действием. Добавляют его в корм из расчета 0,002–0,003 мг/кг комбикорма карпу в течение 100, а форели – 120 сут. Это обеспечивает повышение массы сеголеток рыб соответственно на 24,9% и 15,4% по сравнению с контролем.

Гормон роста бычий для рыб.

Продуцируется L-клетками, расположенными в дистальном отделе гипофиза. В связи с тем, что он имеет белковую природу, для введения этого гормона применяют, в основном, внутримышечные и внутриполостные инъекции или вживляют таблетированные препараты. В опытах (12 и 21 день) с разноразмерными мальками угря, когда гормон добавляли в корм в количестве 2 и 10 мг/кг корма, скорость роста рыб возрастала на 60%. Ряд исследований посвящен определению оптимальной дозы гормона. Малькам кижуча массой 4,42–8,54 г его вводили с помощью внутриполостных и внутрибрюшных инъекций в течение 84 дней, после чего наблюдали за ростом рыб. В этих экспериментах лучше всего росли рыбы, получавшие 5 мкг/г 2 раза/нед указанными способами (контрольные рыбы росли медленнее всех).

Выявлено, что бычий гормон в концентрации 10–30 мкг/г в неделю дает устойчивый стимулирующий эффект. При этом у мальков этот эффект выражен сильнее, чем у рыб старших групп. Бычий гормон роста вводили также карпу и тиляпии, при этом рост обоих видов рыб ускорялся. Малькам карпа массой 2,5–3,4 г в течение 30 дней в полость тела инъецировали гормон 12,6, 25, 50, 100 мкг/г массы тела в неделю. Рост рыб улучшается пропорционально дозе вводимого гормона. При этом было показано, что у рыб, получавших бычий гормон роста, отмечается повышенный аппетит и эффективность конвертирования пищи в прирост.

Гормон роста рыб.

Годовикам кижуча массой 11,4–15,6 г вводили экстракт гипофиза чавычи по 10 и 100 мкг/г тела 1 раз/нед. При этом получен выраженный стимулирующий эффект, наибольшее значение которого отмечено при дозе 100 мкг/г. Считается, что гормон роста, с одной стороны,воздействует на центры в гипоталамусе, регулирующие потребление пищи, с другой – действует на обмен веществ, возможно, также через гипоталамус. Установлено, гормон роста стимулирует потребление пищи рыбами и эффективность ее использования.

Гормоны стероидные для рыб.

Различные виды рыб лучше растут, если подвергаются дополнительному воздействию стероидных гормонов или их аналогов. Гормональное воздействие делает возможной инверсию пола рыб. Введение радужной форели 17-L-метилтестостерона позволяет получить стерильных рыб до возраста 2 года и выше; стимулирует их рост. Гормоны можно вводить с кормом, что в значительной мере предопределяет перспективность их применения; обсуждается возможность обработки рыб гормональными препаратами, растворенными в воде.

Анаболическое действие стероидов обнаружено у 20 видов рыб, главным образом лососевых. Известны, по меньшей море, 14 веществ, способных вызвать анаболический эффект у рыб. Почти все они андрогены, но эффективность их различна. Дня молоди кижуча метилтестостерон эффективнее II-кетостерона, который, в свою очередь, эффективнее, чем тестостерон. В то же время для карпа наиболее эффективным оказался этилэстерол. Следующие по эффективности: оксандрол > адреностерол > диметазин > ципростерон ацетат> II-кетостерон > тестостерон > тренболон ацетат. Приросты рыб, получавших эти вещества в течение 60 дней, значительно превосходят таковые контрольных рыб. Однако через 30 дней после прекращения добавления этих веществ в корм скорость роста рыб, получавших первые пять веществ, относительно контроля снижается, а скорость роста рыб, обработанных двумя оставшимися веществами, возрастает.

Гормоны тиреоидные для рыб.

Гормональный препарат, изготовляемый из обезжиренных высушенных щитовидных желез убойного скота. Порошок светло-желтого цвета со слабым запахом, характерным для высушенных животных тканей. Не растворим в воде, спирте и других растворителях. Содержит от 0,17 до 0,23% органически связанного йода.

У рыб известно два гормона, вырабатываемых фолликулярными клетками щитовидной железы: тироксин (Т 4) и 3,5,3’-три-йодо-L-тиронин (Т 3). Тироксин является основным первичным продуктом щитовидной железы, из которого образуется Т 3 . Введение тироидных гормонов рыбам (путем инъекций или с кормом) может замедлять или ускорять их рост. Замедление роста происходит при повышенных дозах Т 4 или Т 3 , но при удачно подобранных дозах можно получить устойчивый ростостимулирующий эффект. Это подтверждено результатами экспериментов, выполненных на разных видах рыб.

Показано, что тиреоидные гормоны стимулируют потребление пищи, поэтому их применение наиболее эффектно при больших рационах. С помощью меченых аминокислот показано, что введение Т 3 в организм рыбы повышает вовлечение аминокислот в белки и уровень белка в плазме крови. Кроме того, показано, что этот гормон стимулирует переваримость и усвоение углеводов корма, что улучшает эффективность утилизации белка и его использование для роста.

Читайте также:  Тетрамин корм для рыб 10 литров

________________________________________
Присоединяйтесь к нашим группам  vkontakte.pngFacebook

Источник

Лекарственные средства, содержащие биологически активные вещества – гормоны или синтетические препараты для рыб, обладающие физиологической активностью гормонов. В химическом отношении представляют собой белки, полипептиды, аминокислоты, гликопротеиды и стероиды. В крови животных они циркулируют в свободном или связанном состоянии и, подвергаясь изменениям в процессе обмена веществ, образуют метаболиты, ряд из которых также биологически активные вещества. В последние годы очень интенсивно ведутся исследования по стимуляции роста рыб с помощью гормональных препаратов.

Используют три группы гормонов для рыб: анаболические стероиды, соматотропные гормоны (млекопитающих и рыб) и тероидные гормоны.

Гормон из экстракта растений.

Стероид обладает анаболическим действием. Получают из экстракта тканей растения серпуха (Serratula inermis). Гормон под названием «экдистен» разрешен к применению в медицинской практике и используется как тонизирующее средство. Его преимущества для рыб по сравнению с другими гормональными препаратами: он не является эндогенным; не обладает побочным действием; не загрязняет среду обитания и рыбу, будучи применяемым в микродозах. Обладает хорошим ростостимулирующим действием. Добавляют его в корм из расчета 0,002–0,003 мг/кг комбикорма карпу в течение 100, а форели – 120 сут. Это обеспечивает повышение массы сеголеток рыб соответственно на 24,9% и 15,4% по сравнению с контролем.

Гормон роста бычий для рыб.

Продуцируется L-клетками, расположенными в дистальном отделе гипофиза. В связи с тем, что он имеет белковую природу, для введения этого гормона применяют, в основном, внутримышечные и внутриполостные инъекции или вживляют таблетированные препараты. В опытах (12 и 21 день) с разноразмерными мальками угря, когда гормон добавляли в корм в количестве 2 и 10 мг/кг корма, скорость роста рыб возрастала на 60%. Ряд исследований посвящен определению оптимальной дозы гормона. Малькам кижуча массой 4,42–8,54 г его вводили с помощью внутриполостных и внутрибрюшных инъекций в течение 84 дней, после чего наблюдали за ростом рыб. В этих экспериментах лучше всего росли рыбы, получавшие 5 мкг/г 2 раза/нед указанными способами (контрольные рыбы росли медленнее всех).

Выявлено, что бычий гормон в концентрации 10–30 мкг/г в неделю дает устойчивый стимулирующий эффект. При этом у мальков этот эффект выражен сильнее, чем у рыб старших групп. Бычий гормон роста вводили также карпу и тиляпии, при этом рост обоих видов рыб ускорялся. Малькам карпа массой 2,5–3,4 г в течение 30 дней в полость тела инъецировали гормон 12,6, 25, 50, 100 мкг/г массы тела в неделю. Рост рыб улучшается пропорционально дозе вводимого гормона. При этом было показано, что у рыб, получавших бычий гормон роста, отмечается повышенный аппетит и эффективность конвертирования пищи в прирост.

Гормон роста рыб.

Годовикам кижуча массой 11,4–15,6 г вводили экстракт гипофиза чавычи по 10 и 100 мкг/г тела 1 раз/нед. При этом получен выраженный стимулирующий эффект, наибольшее значение которого отмечено при дозе 100 мкг/г. Считается, что гормон роста, с одной стороны,воздействует на центры в гипоталамусе, регулирующие потребление пищи, с другой – действует на обмен веществ, возможно, также через гипоталамус. Установлено, гормон роста стимулирует потребление пищи рыбами и эффективность ее использования.

Гормоны стероидные для рыб.

Различные виды рыб лучше растут, если подвергаются дополнительному воздействию стероидных гормонов или их аналогов. Гормональное воздействие делает возможной инверсию пола рыб. Введение радужной форели 17-L-метилтестостерона позволяет получить стерильных рыб до возраста 2 года и выше; стимулирует их рост. Гормоны можно вводить с кормом, что в значительной мере предопределяет перспективность их применения; обсуждается возможность обработки рыб гормональными препаратами, растворенными в воде.

Анаболическое действие стероидов обнаружено у 20 видов рыб, главным образом лососевых. Известны, по меньшей море, 14 веществ, способных вызвать анаболический эффект у рыб. Почти все они андрогены, но эффективность их различна. Дня молоди кижуча метилтестостерон эффективнее II-кетостерона, который, в свою очередь, эффективнее, чем тестостерон. В то же время для карпа наиболее эффективным оказался этилэстерол. Следующие по эффективности: оксандрол > адреностерол > диметазин > ципростерон ацетат> II-кетостерон > тестостерон > тренболон ацетат. Приросты рыб, получавших эти вещества в течение 60 дней, значительно превосходят таковые контрольных рыб. Однако через 30 дней после прекращения добавления этих веществ в корм скорость роста рыб, получавших первые пять веществ, относительно контроля снижается, а скорость роста рыб, обработанных двумя оставшимися веществами, возрастает.

Гормоны тиреоидные для рыб.

Гормональный препарат, изготовляемый из обезжиренных высушенных щитовидных желез убойного скота. Порошок светло-желтого цвета со слабым запахом, характерным для высушенных животных тканей. Не растворим в воде, спирте и других растворителях. Содержит от 0,17 до 0,23% органически связанного йода.

У рыб известно два гормона, вырабатываемых фолликулярными клетками щитовидной железы: тироксин (Т 4) и 3,5,3’-три-йодо-L-тиронин (Т 3). Тироксин является основным первичным продуктом щитовидной железы, из которого образуется Т 3 . Введение тироидных гормонов рыбам (путем инъекций или с кормом) может замедлять или ускорять их рост. Замедление роста происходит при повышенных дозах Т 4 или Т 3 , но при удачно подобранных дозах можно получить устойчивый ростостимулирующий эффект. Это подтверждено результатами экспериментов, выполненных на разных видах рыб.

Читайте также:  Чем покормить рыбку петушка если нет корма

Показано, что тиреоидные гормоны стимулируют потребление пищи, поэтому их применение наиболее эффектно при больших рационах. С помощью меченых аминокислот показано, что введение Т 3 в организм рыбы повышает вовлечение аминокислот в белки и уровень белка в плазме крови. Кроме того, показано, что этот гормон стимулирует переваримость и усвоение углеводов корма, что улучшает эффективность утилизации белка и его использование для роста.

________________________________________
Присоединяйтесь к нашим группам  vkontakte.pngFacebook

Источник

Уже давно гормональные стероидные препараты применяются в разных сферах жизни человека.
Я думаю, не для кого не секрет, что они полным ходом используются в ветеринарии. Уже много лет вполне успешно применяются на крупном рогатом скоте, в конной индустрии, в собаководстве (как правило, в бойцовских породах), и так далее…
Стероидные гормональные препараты коснулись и рыбной сферы, как у промышленных сортов рыб, так и у аквариумных.

Информации в интернете всё равно очень мало, и зачастую она очень противоречивая. В аквариумной сфере тем более.
Эксперименты зачастую не дают эффекта, потому как гормональные препараты рассчитанные на млекопитающих, и зачастую не ароматизируются у рыб. Но всё же есть результаты!

С моим очень скромным опытом аквариумистики и недостаточной возможности достать многие препараты, когда то удавалось искусственно получать 95% потомства нужного мне пола у икрамечащих рыб. При чём определёнными препаратами можно добиться как самцов, так и самок.
И это с применением фарм.средств не предназначенных для рыб.

Вот на Львовском форуме нашел статейку

В последнее время для форсирования процессов созревания рыб используют эндокринные средства (мг/кг при однократной обработке):
эстрофан (0,1—0,5),
кломифенцитрат (1 —10),
прогестерон (1)
,кортизол (65— 225),
метапирон (1),
эстрадиол (10—245),
кортикостерон (53—225),
лютеотропный гормон — ЛГ (1—3,5),
люлибирин или гонадолибирин (0,5—2)

Заметно ускорить темп роста рыб можно с помощью внутримышечных инъекций (мг/кг):

бычьего гормона роста или бычьего инсулина (10),
4-хлор-тестостеронацетата (0,5),
тиреоидина (10),
тестостеронпропионата (10),
метиландростенедиола (4 мг/кг через каждые 4 суток);
или при добавке в корм (мг/кг):
этилэстрола (2,5),
17-метилтестостерона (1—2),
диметазина (5),
17-этинилтестостерона (2,5—3,5),
метиландростерона (15),
андростедиона (500),
тестостеронпропионата (560),
андростерона (580),
дегидроэпиандростерона (3200),
тестостерона (10),
оксиметолона (10),
11-кетотестостерона (10),
станазола (833),
тиреоидина (60),
1-дегидростеронацетата (15),
сухого тиреоида (6),
крезацина (10—20)
и трииодтиронина (20 мг/кг).

Получить 100% самцов можно при внесении в корм рыбам (от 50 до 100 мг/кг) метилтестостерона и этинилтестостерона,
а 100% самок вырастает при обработке малька этинилэстрадиолом (50 мг/кг) и эстрадиол ом (20 мг/кг).

Для получения максимально большого разнообразия в потомстве рыб применяют мутагенные вещества:
этиленимин,
эфиры сульфоновой кислоты,
гидроксиламин, диметилсульфат (0, 11—0, 13 mM),
нитрозоалкилмочевину,
нитрозоэтилмочевину,
нитрозометилмочевину (0, 97—9, 7 mM).

Наибольшей результативностью обладают комплексные инъекции гипофиза (1-2 мг/кг) и хориогонина (500—1000 МЕ/кг), а также смеси гипофиза с пилокарпином (0,001 %-ного раствора 0,5—1 мл/кг), гестофирином (0,5 мг/кг) или нитратом стрихнина (0,5—1 мг) в сочетании с витаминами B1 (2,4 мг), С (5 мг) и 40%-ным раствором глюкозы на 1 кг массы рыбы.
В последнее время для формирования процессов созревания рыб используют новые эндокринные средства, мг/кг при одноразовой обработке:
эстрофан (0, 1—0, 5),
кломифенцитрат (1—10),
прогестерон (1),
кортизон (65—225),
метапирон (1),
эстрадиол (10—245),
кортикостерон (53—225), люлиберин или
гонадолиберин (0, 5—2).

Хорошие результаты получены на двухцветном лабео с двукратной инъекцией: первая — хориогонином, вторая — через сутки суспензией гипофиза (2 мг гипофиза на 100 г массы рыбы).

Прекрасный нерест макрогнатусов через сутки после однократной инъекции хориогонина самкам и самцам в спинную мышцу примерно посредине тела (по 100 ЕД). Единственным условием успеха является то, что гормон надо вводить с возможно меньшим количеством растворителя, желательно не более 0,25 см3.
Успешно разведен таиландский мастацембелус с использованием двукратной инъекции. При предварительном инъецировании самкам вводили в мышцы спины по 200 ЕД хориогонического гонадотропина, самцам — по 50 ЕД.При разрешающей инъекции доза соответственно 0, 6 и 0, 3 мг гипофиза в 0, 1 мл суспензии. Через 3 ч после разрешающей инъекции для дополнительной стимуляции нереста следует увеличить подачу воздуха в аквариум. Через 3 ч после этого начинаются бурные брачные игры — рыбы буквально свиваются в клубок, после чего начинается икрометание.

Анестезирующие вещества применяют в двух случаях; для кратковременного обездвиживания рыб на 1—5 мин, с целью пересадки из одной емкости в другую или для проведения инъекционных работ, а также искусственного получения половых продуктов; для длительного снижения активности рыб (на несколько часов) при их перевозке.
При действии малых доз анестетика рыбы через несколько минут сначала становятся малоподвижными, далее ложатся на дно или всплывают, продолжая дыхательные движения жабрами. При передозировке у рыб прекращаются движения жаберных крышек, и они могут погибнуть. Обычно при одной и той же концентрации анестетика при более высокой температуре его действие более эффективно, чем при более низкой. Прекращение наркоза осуществляется пересадкой рыб в свежую воду. температура ее должна быть на 1—5°С ниже той, которая была при наркозе. Рыбы с разной видовой активностью и разных размеров требуют различных концентраций анестетика.
Растворы анестетиков обычно хранят не более трех дней. Для кратковременной наркотизации используют следующие анестетики в соответствующих концентрациях:
амилен-гидрат (7—13 г/л),
гидрохлорид-2-метил-4-винилоксихинолин (10— 20 мл/л),
комбелен (0,1—0,2 мл/л),
метилпентанол (0,5— 1 мл/л),
метилпаратимол (2—4 мл/л),
бикарбонат натрия (0,4—0,6 г/л),
пропоксат (3—4 мл/л),
пропоксимол (0,05— 0,4 мл/л),
третичный амиловый спирт (0,25—0,5 мл/л),
третичный бутиловый спирт (0,3—3,5 мл/л),
трибромэтанол (5—50 мл/л),
трикаин-метансульфонат (MS-222) (0,13— 0,26 г/л),
трихлорбутанол (0,25—0,4 г/л), СО2 (0,2—0,4 г/л),
хинальдин (5—12 мг/л),
хинальдин-гидрохлорид (25 мг/л),
хлоралгидрат (20—30 г/л),
хлорэтон (0,2—0,4 г/л),
эвгенол (100 мг/л), серный эфир (17,2 мг/л),
уретан (0,5— 1 мг/л).
Для приготовления раствора хильнальдина 0, 1 мл его маслянистой жидкости растворяют в 1—2 мл этилового спирта или ацетона, после чего смесь выливают в емкость с 4,5—6 л воды.
Продолжительность нахождения рыбы в растворе хинальдина не должна превышать 10 мин.

Читайте также:  Как сделать корм для волнистого попугая

При перевозке рыбы на небольшие расстояния в качестве анестетика используют:
для морских рыб — амобарбитал в концентрации 105—130 мг/л,
для пресноводных рыб— амиленгидрат (0, 5—1, 25 мл/л),
хлоралгидрат (2,3—3,1 г/л)
или трикаин-метансульфонат (MS-222) (10—25 мг/л).
Реакцию воды стабилизируют бикарбонатом натрия (150 мг/л).
Плотность посадки рыбы при наркотизации можно увеличить в 2—3 раза относительно нормы.
Хорошие результаты при перевозке рыб в течение 6—8 ч дает использование смеси анестетиков: менокаина и хинальдина по 10 мг/л. Эта смесь обладает малой размерной и видовой специфичностью действия и может использоваться для перевозки как пресноводных, так и морских рыб.
Заметно ускорить темп роста рыб можно с помощью внутримышечных инъекций:
бычьего гормона роста (10 мг/кг, ежедневно),
бычьего инсулина (0, 3—10 МЕ/кг ежедневно),
4-хлоротестостеронацетата (по 0, 5 мг/кг каждые 4-е сутки), тестостеронпропионата (по 10 мг/кг каждые 4-е сутки),
метиландростендиона (по 4 мг/кг каждые 4-е сутки);
тиреоидина (10 мг/кг).
Более удобно гормональные препараты роста вводить в корм в концентрации, мг/кг корма:
этилэстрол (2,5),
диметазин (5),
17-метилтестостерон (1—2), 17-этинилтестостерон (2,5—3,5), метиландростендион (7,8),
метиландростерон (15),
андростендион (500),
тестостеронпропионат (560),
андростерон (580),
дегидроэпиандростерон (3,22 г/кг),
тестостерон (10 мг/кг),
11-кетотестостерон (10),
оксиметолон (10),
станазол (833),
1-дегидростеронацетат (15), тиреоид быка (20), тиреоид сухой (6), трийодтиронин (20), крезацин (10—20), тиреоидин (60 мг/кг), При добавлении тиреоидина непосредственно в воду его концентрация, ускоряющая рост, равна 0,1—10 мг на 1 л воды.

Для закрепления признаков прибегают к получению полиплоидного потомства, отличающегося большей жизнестойкостью и акселерацией. Тетраплоидное потомство получают за счет обработки икры в нерестовике сразу после нереста в момент набухания икры и прохождения первой полосы дробления колхицином или его менее токсичным аналогом колцемидом в концентрации 1 мг/л в течение нескольких минут, после чего икру отмывают от препарата.

0,1 г метилтестостерона растворяют в 100 см3 70%-ного этилового или метилового спирта, после чего в этот раствор вливают 900 см3 дистиллированной воды. Таким образом получается 1 л раствора, который через день вносится в аквариум с рыбой из расчета 1 капля на 1 л воды. Результат – самки проявляют всю окраску, которая в них заложена генетически.
Выращенных в растворе метилтестостерона самцов по характеру окраски можно безошибочно рассортировать на две группы: генотипических самцов и генотипических самок.
Генотипические самцы окрашены «богаче», так как их украшают цветные пятна, сцепленные и с мужским, и с женским полом, а самцы-инвертанты (генотипические самки) украшены цветными пятнами, сцепленными только с женским полом. Именно эти не заметные до гормональной обработки признаки и передают матери своим сыновьям, у которых они становятся заметными благодаря более высокому содержанию мужского полового гормона у самцов по сравнению с самками (и мужские, и женские половые гормоны образуются у особей обоих полов, но в различных соотношениях).
Самцы-инвертанты способны к размножению, но их потомство состоит из одних генотипических самок, а потомство выращенных в растворе гормона, но не утративших способности к размножению генотипических самцов состоит, как обычно, из равного количества нормальных самок и самцов.
X. Г. Петцольд (1960) сообщает (без указания дозировки), что добавление в воду тиреоидина замедляет развитие гуппи, Но позволяет вырастить их на 1/7 крупнее (длиннее), чем обычно.Такая возможность подтверждается опытами с лососем при добавлении в воду 0, 1—10, 0 мг/л тиреоидина (В. В. Яржомбек и др., 1986).

Таблица 11. Гормональные воздействия, вызывающие ускорение
роста рыб (В. В. Яржомбек и др., 1986)
Гормон Рыба Концентрация в корме мг/кг
Андрогены
17-метилтестостерон Карась 1-2
17-этинилтестостерон Форель 3,4
Метиландростерон Карась 15
Андростендион Форель 500
Дегидроэпиандростерон Форель 3200
Тестостерон Кижуч 10
11-кетотестостерон Кижуч 10
Эстрогены
Этилэстрол Семга 2,5
Диметазин Форель 5,0
Гормоны щитовидной железы
Тиреоид быка Лосось 20
Тиреоид сухой Лосось 6
Тиреоидин Лосось 60
Трийодтиронин Лосось 20

Но информация по дозировкам подобных препаратов очень противоречивая… но возможно это из за того, что каждый препарат по-разному ароматизируется у рыб (усваивается) и поэтому нужны повышенные дозировки? code44

У кого был опыт использования подобных препаратов для ускорения роста и развития у рыб? Каких результатов было достигнуто? Какие препараты были использованы?

Источник