Госты на ту корма растительного происхождения
ОКС 65 120
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением “Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов” (ФГБУ “ВГНКИ”)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 “Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов”
3 УТВЕРЖДЕН и ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 июля 2014 г. N 705-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Февраль 2020 г.
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ “О стандартизации в Российской Федерации”. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе “Национальные стандарты”, а официальный текст изменений и поправок – в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты”. Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на корма, кормовые добавки и сырье для их производства и устанавливает метод идентификации и количественного определения содержания генетически-модифицированной* сои (далее – ГМ сои) и генетически-модифицированной* кукурузы (далее – ГМ кукурузы) методом полимеразной цепной реакции (далее – ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR).
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. Здесь и далее. – Примечание изготовителя базы данных.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 31719 Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)
ГОСТ ISO 6497 Корма. Отбор проб
ГОСТ ISO/IEC 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ Р 51848 Продукция комбикормовая. Термины и определения
ГОСТ Р 52173 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически-модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения
ГОСТ Р 53244 (ИСО 21570:2005) Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически-модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на количественном определении нуклеиновых кислот
ГОСТ Р 55576-2013 Корма и кормовые добавки. Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты” за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины, определения и сокращения по ГОСТ ISO 6497, ГОСТ Р 51848, ГОСТ Р 55576 и ГОСТ 31719.
4 Условия выполнения испытаний и требования безопасности
Условия выполнения испытаний и требования безопасности – по ГОСТ Р 55576-2013 (раздел 4, приложение А).
5 Оборудование, материалы и реагенты
5.1 Требования к оборудованию – по ГОСТ Р ISO/IEC 17025.
5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, а также следующие:
– бокс ламинарный II класса биологической безопасности;
– отсасыватель вакуумный медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости;
– микропробирки одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся вместимостью 1,5 см;
– микропробирки одноразовые полипропиленовые вместимостью 0,2 см;
– ПЦР-бокс;
– прибор для проведения ПЦР;
________________
Прибор для проведения ПЦР “Rotor-Gene” 2000/3000/6000 (“Corbett Research“, Австралия). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
– халаты медицинские.
Допускается использование другого оборудования и материалов с техническими характеристиками не хуже указанных выше.
5.3 При проведеним испытаний применяют реагенты для экстракции ДНК по ГОСТ Р 55576, а также следующие реагенты, праймеры и зонды для проведения ПЦР и амплификации.
5.3.1 Реагенты:
– вода деионизованная;
– ПЦР-буфер;
– раствор дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ) 10 (10-кратная смесь четырех компонентов с концентрацией каждого компонента 1,7610 моль/дм);
– Taq-полимераза термостабильная;
– образцы стандартные состава ГМ сои и ГМ кукурузы, содержащие от 0,1% до 5,0% линий ГМ сои и ГМ кукурузы.
________________
Стандартные образцы состава ГМ сои и ГМ кукурузы “Сигма Алдрич”, CCM от JRC, IRMM. Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Допускается использование других реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше.
5.3.2 Праймеры (смесь олигонуклеотидов) и зонды (меченные флуоресцентными красителями FAM и R6G):
5.3.2.1 Для определения ГМ сои линии 40-3-2:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-GCC ATG TTG TTA ATT TGT GCC AT 3′;
2) праймер 2: 5′-GAA GTT CAT TTC ATT TGG AGA GGA C 3′;
3) зонд: 5′-FAM-CTT GAA AGA TCT GCT AGA GTC AGC TTG TCA GCG – BHQ1-3′;
б) специфичные гену лектина (lec 1):
1) праймер 1: 5′-TCC ACC CCC ATC CAC ATT T-3′;
2) праймер 2: 5′-GGC ATA GAA GGT GAA GTT GAA GGA-3′;
3) зонд: 5′-R6G-AAC CGG TAG CGT TGC CAG CTT CG-BHQ1-3′;
5.3.2.2 Для определения ГМ сои линии А2704-12:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-GCA AAA AAG CGG TTA GCT CCT-3′;
2) праймер 2: 5′-ATT CAG GCT GCG CAA CTG TT-3′;
3) зонд: 5′-FAM-CGG TCC TCC GAT CGC CCT TCC-BHQ1-3′;
б) специфичные гену лектина (lec 2):
1) праймер 1: 5′-CAC CTT TCT CGC ACC AAT TGA CA-3′;
2) праймер 2: 5′-TCA AAC TCA ACA GCG ACG AC-3′;
3) зонд: 5′-P6G-CCA CAA ACA CAT GCA GGT TAT CTT GG-BHQ1-3′;
5.3.2.3 Для определения ГМ сои линии А5547-127:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′- GCT ATT TGG TGG CAT TTT TCC A 3′;
2) праймер 2: 5′-CAC TGC GGC CAA CTT ACT TCT 3′;
3) зонд: 5′-FAM-CC GCA ATG TCA TAC CGT CAT CGT TGT-BHQ1-3′;
б) специфичные гену лектина (lec 3):
1) праймер 1: 5′-CCT TCT CGC ACC AAT TGA CA-3′;
2) праймер 2: 5′-TCA AAC TCA ACA GCG ACG AC-3′;
3) зонд: 5′-R6G-CC ACA AAC ACA TGC AGG TTA TCT TGG-BHQ1-3′;
5.3.2.4 Для определения ГМ кукурузы линии MON 810:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-TCG AAG GAC GAA GGA CTC TAA CGT-3′;
2) праймер 2: 5′-GCC ACC TTC CTT TTC CAC TAT CTT-3′;
3) зонд: 5′-FAM-AAC ATC CTT TGC CAT TGC CCA GC-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (hmg):
1) праймер 1: 5′-TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA-3′;
2) праймер 2: 5′-GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T-3′;
3) зонд: 5′-R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1-3′;
5.3.2.5 Для определения ГМ кукурузы линии NK 603:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-ATG AAT GAC CTC GAG TAA GCT TGT TAA-3′;
2) праймер 2: 5′-AAG AGA TAA CAG GAT CCA CTC AAA CAC T-3′;
3) зонд: 5′-FAM-TGG TAC CAC GCG ACA CAC TTC CAC TC-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 1):
1) праймер 1: 5′-CCA GCC TCA TGG CCA AAG-3′;
2) праймер 2: 5′-CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG-3′;
3) зонд: 5′-R6G-CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT-BHQ1-3′;
5.3.2.6 Для определения ГМ кукурузы линии Bt 11:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-GCG GAA CCC CTA TTT GTT TA-3′;
2) праймер 2: 5′-TCC AAG AAT CCC TCC ATG AG-3′;
3) зонд: 5′-FAM-AAA TAC ATT CAA ATA TGT ATC CGC TCA-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 2):
1) праймер 1: 5′-CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC-3′;
2) праймер 2: 5′-CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC-3′;
3) зонд: 5′-R6G-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-BHQ1-3′;
5.3.2.7 Для определения ГМ кукурузы линии T 25:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-ACA AGC GTG TCG TGC TCC AC-3′;
2) праймер 2: 5′-GAC ATG ATA CTC CTT CCA CCG-3′;
3) зонд: 5′-FAM-TCA TTG AGT CGT TCC GCC ATT GTC G-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 3):
1) праймер 1: 5′-CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CCT-3′;
2) праймер 2: 5′-CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC-3′;
3) зонд: 5′-R6G-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-BHQ1-3′;
5.3.2.8 Для определения ГМ кукурузы линии GA 21:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-CTT ATC GTT ATG CTA TTT GCA ACT TTA GA-3′;
2) праймер 2: 5′-TGG CTC GCG ATC CTC CT-3′;
3) зонд: 5′-FAM-CAT ATA CTA ACT CAT ATC TCT TTC TCA ACA GCA CCT GGG-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 4):
1) праймер 1: 5′-CCA GCC TCA TGG CCA AAG-3′;
2) праймер 2: 5′-CCT TCC TTG GCG GCT TAT CTG-3′;
3) зонд: 5′-R6G-CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT-BHQ1-3′;
5.3.2.9 Для определения ГМ кукурузы линии MIR 604:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-GCG CAC GCA ATT CAA CAG-3′;
2) праймер 2: 5′-GGT CAT AAC GTC ACT CCC TTA ATT CT-3′;
3) зонд: 5′-FAM-AGG CGG GAA ACG ACA ATC TGA TCA TG-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 5):
1) праймер 1: 5′-CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC-3′;
2) праймер 2: 5′-CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC-3′;
3) зонд: 5′-R6G-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-BHQ1-3′;
5.3.2.10 Для определения ГМ кукурузы линии MON 863:
а) специфичные целевой последовательности:
1) праймер 1: 5′-GTA GGA TCG GAA AGC TTG GTA C-3′;
2) праймер 2: 5′-TGT TAC GGC CTA AAT GCT GAA CT-3′;
3) зонд: 5′-FAM-TGA ACA CCC ATC CGA ACA AGT AGG GTC A-BHQ1-3′;
б) специфичные гену зеина (adhl 6):
1) праймер 1: 5′-CCA GCC TCA TGG CCA AAG-3′;
2) праймер 2: 5′-CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG-3′;
3) зонд: 5′-R6G-CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT-BHQ1-3′.
6 Сущность метода
6.1 Сущность метода идентификации и количественного определения содержания ГМ сои и ГМ кукурузы методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR) заключается в проведении двух независимых ПЦР в одной пробирке с использованием специфичных праймеров и зондов, меченных флуоресцентными красителями, с целью выявления участка эндогенной ДНК, характерной для всех линий ГМ сои или ГМ кукурузы, и участка рекомбинантной ДНК, специфичной для определенных генетических линий.
6.2 Возможно проведение ПЦР в двух пробирках с использованием одного красителя по ГОСТ Р 53244.
7 Отбор проб
Отбор лабораторных проб, подготовка анализируемой пробы, условия хранения и транспортирования – по ГОСТ Р 55576.
8 Экстракция ДНК
Экстракцию ДНК проводят в соответствии с ГОСТ Р 52173 или ГОСТ Р 55576.
9 Постановка ПЦР и проведение амплификации с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR)
9.1 Приготовление реакционной ПЦР-смеси
Для приготовления реакционной ПЦР-смеси для определения ГМ сои или ГМ кукурузы берут 1 мм деионизованной воды, по 1 мм каждого праймера 1 по 5.3.2 концентрацией 510 моль/дм, по 1 мм каждого праймера 2 по 5.3.2 концентрацией 510 моль/дм, по 1 мм каждого зонда по 5.3.2 концентрацией 310 моль/дм, 3 мм раствора дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ) и смешивают в пробирке вместимостью 1,5 см.
Срок хранения готовой ПЦР-смеси при температуре не выше минус 18°С – не более 12 мес.
9.2 Постановка ПЦР
9.2.1 ДНК, экстрагированную из анализируемой пробы (включая стандартные образцы), испытывают не менее чем в двух повторностях.
9.2.2 Для проведения двух независимых ПЦР в одной пробирке смешивают 10 мм ПЦР-смеси по 9.1, 5 мм ПЦР-буфера и 0,5 ммполимеразы (TaqF). Смесь перемешивают и осаждают на микроцентрифуге-встряхивателе в течение 15-30 с.
9.2.3 В микропробирку вместимостью 0,2 см вносят по 15 мм смеси, полученной по 9.2.2, затем, используя наконечник с аэрозольным барьером, добавляют в нее 10 мм ДНК, полученной экстракцией из анализируемой пробы (ДНК-проба) в соответствии с разделом 8. Общий объем реакции – 25 мм.
9.2.4 Ставят контрольные реакции амплификации:
– отрицательный контрольный образец (К-) – вместо ДНК-пробы вносят в микропробирку со смесью по 9.2.2 10 мм ТЕ-буфера;
– положительный контрольный образец (К+) – вместо ДНК-пробы вносят в микропробирку со смесью по 9.2.2 10 мм 1%-ного стандартного образца состава ГМ сои и ГМ кукурузы.
9.2.5 При каждой постановке ПЦР ставят шесть реакций амплификации со стандартными образцами ГМ сои и ГМ кукурузы для построения калибровочной кривой. Для этого в три микропробирки со смесью по 9.2.2 вносят по 10 мм каждого стандартного образца, содержащего от 0,1% до 5,0% линий ГМ сои и ГМ кукурузы. Реакцию амплификации проводят в двух повторностях.
Примечание – Стандартный образец может иметь любую концентрацию в пределах указанного диапазона.
9.3 Проведение амплификации и детекции флуоресцентного сигнала
Программируют прибор для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Программа амплификации для количественного определения ГМ сои приведена в таблице 1.
Таблица 1
Стадия амплификации | Программа |
Денатурация первичная | 95°С/5 мин |
45 циклов | 95°С/15 с |
60°С/30 с | |
72°С/30 с |
Детекцию проводят при температуре 60°С по каналам FAM/Green, JOE/Yellow.
Программа амплификации для количественного определения ГМ кукурузы приведена в таблице 2.
Таблица 2
Стадия амплификации | Программа |
Денатурация первичная | 95°С/15 мин |
10 циклов | 95°С/15 с 60°С/20 с 72°С/15 с |
35 циклов | 95°С/15 с 55°С/20 с 72°С/15 с |
Детекцию проводят при температуре 55°С по каналам FAM/Green, JOE/Yellow.
Детекцию флуоресцентного сигнала проводят на каналах FAM и JOE. По каналу FAM регистрируют уровень флуоресценции для генетической линии, по каналу JOE – для эндогенной ДНК ГМ сои или ГМ кукурузы. Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируют с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме реального времени (Real Time PCR).
Границы интервала, в котором погрешность определения находится с доверительной вероятностью P=0,95, составляют от 0,1% до 5,0%, нижнюю и верхнюю границы погрешности определяют с использованием стандартных образцов.
Стандартное отклонение повторяемости результатов составляет от 0,067 (для 0,1%) до 0,54 (для 5%).
Коэффициент корреляции калибровочной прямой, построенной по стандартным образцам ГМО, >0,97. Если коэффициент корреляции менее 0,97 – требуется повторный анализ всех проб, начиная с этапа амплификации.
9.4 Учет результатов
Учет результатов и расчет содержания ГМ сои или ГМ кукурузы проводят по ГОСТ Р 53244.
9.5 Возможные ошибки
Возможные ошибки – по ГОСТ Р 55576-2013 (подраздел 10.3).
УДК 636.086.15:636.086.006.034 | ОКС 65 120 |
Ключевые слова: корма, кормовые добавки, генетически модифицированные организмы, генетически модифицированная соя, генетически модифицированная кукуруза, полимеразная цепная реакция, гибридизационно-флуоресцентная детекция в режиме реального времени, амплификация, рекомбинантная ДНК, праймеры, зонды | |
Электронный текст документа
подготовлен АО “Кодекс” и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2020
Источник
ГОСТ 27548-97
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОРМА РАСТИТЕЛЬНЫЕ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВЛАГИ
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ
ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
Минск
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Центральным научно-исследовательским институтом агрохимического обслуживания сельского хозяйства (ЦИНАО), Всероссийским научно-исследовательским институтом кормов им. В.Р. Вильямса (ВНИИкормов), Всероссийским научно-исследовательским институтом комбикормовой промышленности (АООТ «ВНИИКП»), МТК 4 «Комбикорма, БВД, премиксы»
ВНЕСЕН Госстандартом России
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 12 от 21 ноября 1997 г.)
За принятие проголосовали:
Наименование государства | Наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджанская Республика | Азгосстандарт |
Республика Армения | Армгосстандарт |
Республика Белоруссия | Госстандарт Белоруссии |
Грузия | Грузстандарт |
Республика Казахстан | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизская Республика | Киргизстандарт |
Республика Молдова | Молдовастандарт |
Российская Федерация | Госстандарт России |
Республика Таджикистан | Таджикгосстандарт |
Туркменистан | Главная государственная инспекция Туркменистана |
Республика Узбекистан | Узгосстандарт |
Украина | Госстандарт Украины |
Изменение № 1 принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 24 от 5 декабря 2003 г.)
за принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AZ, AM, KZ, KG, MD, RU, TJ, TM, UZ, UA [коды альфа-2 по МК(ИСО 3166) 004]
3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 19 марта 1998 г. № 69 межгосударственный стандарт ГОСТ 27548-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1999 г.
4 ВЗАМЕН ГОСТ 27548-87
5 ИЗДАНИЕ (июль 2005 г.) с Изменением № 1, принятым в марте 2004 г. (ИУС 6-2004)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОРМА РАСТИТЕЛЬНЫЕ
Методы определения содержания влаги
Vegetable feeds.
Methods for determination of moisture content
Дата введения 1999-01-01
1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт распространяется на все виды растительных кормов – сено, солому, сенную резку, жмыхи, шроты, травяные гранулы и брикеты, силос, сенаж, зеленые корма, корнеплоды, клубнеплоды и устанавливает методы определения содержания влаги.
2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 450-77 Кальций хлористый технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 27262-87Корма растительного происхождения. Методы отбора проб
ГОСТ 28736-90 Корнеплоды кормовые. Технические условия
3 ОТБОР ПРОБ
Отбор проб – по ГОСТ 27262, ГОСТ 28736 и ГОСТ 13979.0.
Разделы 2, 3 (Измененная редакция, Изм. № 1).
4 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ ВЛАГИ ВЫСУШИВАНИЕМ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ (105 ± 2) °С (ОСНОВНОЙ МЕТОД)
Сущность метода заключается в высушивании продукта до постоянной массы при температуре (105 ± 2) °С. Метод распространяется на все виды растительных кормов.
4.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Измельчитель проб растений ИПР-2.
Мезгообразователь МЛ-1.
Мельница лабораторная МРП-2 или другие измельчающие устройства кулачкового или ножевого типа, обеспечивающие не более чем за три цикла продолжительностью 15 с (с отсеиванием после каждого измельчения) проход не менее 70 %измельченной массы шрота или жмыха с ожидаемой масличностью до 10 % включительно через сито с отверстиями диаметром 0,25 мм или не менее 90 %- для жмыхов с ожидаемой масличностью более 10 %через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.
Сушилка кормов СК-1 или шкаф сушильный электрический с терморегулятором, с погрешностью не более ±2 °С.
Сита с отверстиями диаметром 0,25; 0,5 и 1 мм.
Ножницы.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Фарфоровые чашки диаметром 12 см по ГОСТ 9147 или кюветы металлические с сетчатым дном размером 45 см × 26 см × 5 см или кюветы, сделанные из крафт-бумаги аналогичного или иного размера, удобного для высушивания образцов.
Бюксы стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром 20 мм и высотой 35 мм и диаметром 25 мм и высотой 45 мм или бюксы алюминиевые диаметром 50 мм и высотой 40 мм.
Эксикатор по ГОСТ 25336, заправленный хлористым кальцием, прокаленным при температуре 250 °С -300 °С в течение 2 ч.
Щипцы муфельные для тиглей.
Палочки стеклянные диаметром 3 – 5 мм.
Бумага лакмусовая красная.
Песок кварцевый.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., ч.д.а., концентрированная и разбавленная дистиллированной водой 1:1.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Кальций хлористый по ГОСТ 450.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,001 г.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,01 г.
Примечание – Допускается использовать другую аппаратуру, мерную посуду, имеющую такие же или лучшие метрологические характеристики, а также реактивы по квалификации не ниже отечественных.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
4.2 Подготовка к испытанию
4.2.1 Подготовка проб
Из точечных проб анализируемых кормов, отобранных пробоотборником или вручную, составляют объединенную пробу, которую помещают на полиэтиленовую пленку, перемешивают, затем разравнивают тонким слоем и делят по диагонали на четыре треугольника (метод квартования), из которых два противоположных удаляют, а из двух оставшихся образуют среднюю пробу.
Среднюю пробу сена, соломы, сенной резки, силоса, сенажа или зеленых кормов измельчают на отрезки длиной 1 – 3 см, корнеплоды и клубнеплоды нарезают ломтиками толщиной до 0,8 см или измельчают на мезгообразователе. Измельченную пробу тщательно перемешивают и методом квартования выделяют часть средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 150 г.
Высушивают пробы в сушильном шкафу при температуре 60 °С – 65 °С до воздушно-сухого состояния. Воздушно-сухую пробу размалывают на лабораторной мельнице и просеивают через сито диаметром отверстий 1 мм. Остаток на сите измельчают ножницами или в ступке, добавляют к просеянной части и перемешивают.
Среднюю пробу комбикормов, травяной муки, жмыхов, шротов, брикетов и гранул размалывают без предварительного подсушивания. Размолотый материал просеивают через сито, остаток на сите измельчают, добавляют к пробе и перемешивают.
Пробы хранят в сухом месте в чистой стеклянной или пластмассовой банке с плотно закрывающейся крышкой или пробкой.
4.2.2 Очистка кварцевого песка
Кварцевый песок сначала промывают водопроводной водой, затем заливают разбавленной соляной кислотой 1:1 и оставляют на сутки. После этого песок промывают водопроводной водой до исчезновения кислой реакции на лакмус, а затем дистиллированной водой и высушивают. Прокаливание проводят в течение 2 ч при температуре 250 °С – 300 °С и после остывания песок просеивают через сито диаметром отверстий 1 мм.
4.3 Проведение испытания
Стеклянные или алюминиевые бюксы, а также чашки Петри или Коха высушивают при температуре (105 ± 2) °С в течение 1 ч, охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Для определения влаги в корнеплодах и клубнеплодах, а также в жидких и пастообразных кормах в тару перед высушиванием помещают стеклянную палочку и 10 – 15 г кварцевого песка и после высушивания и охлаждения взвешивают тару вместе с палочкой и песком.
Во взвешенную тару помещают навеску испытуемой пробы массой для силоса, сенажа, зеленых кормов, корнеклубнеплодов – 25,0 – 50,0 г; сена, соломы, сенной резки, брикетов, гранул – 10,0 – 15,0 г; жмыхов и шротов – 5,0 г. Взвешивание тары, пробы, а также тары с высушенной пробой при массе навески анализируемой пробы 10 г и менее проводят с погрешностью не более 0,001 г, более 10 г – с погрешностью не более 0,01 г.
Навески корнеплодов и клубнеплодов тщательно перемешивают с песком стеклянной палочкой, которую оставляют в бюксе или чашке. Тару с испытуемой пробой помещают в сушильный шкаф. Крышку снимают и ставят рядом. Высушивание проводят при температуре (105 ± 2) °С. После сушки бюксы и чашки закрывают крышками, охлаждают в эксикаторе в течение 40 – 50 мин.
В зависимости от содержания влаги высушивание пробы проводят в течение 3 – 6 ч. После высушивания пробу можно оставить на лабораторном столе на ночь. На другой день пробу взвешивают, затем ставят подсушить на 1 ч и после охлаждения в течение 1 ч снова взвешивают. Первое взвешивание высушенных навесок жмыхов и шротов проводят через 2 ч, последующие – через 1 ч до получения постоянной массы. Массу считают постоянной, если разница между первым и вторым взвешиванием высушенной и охлажденной пробы не превышает 0,5 % массы высушенной пробы.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
4.4 Обработка результатов
Массовую долю влаги X, %, в испытуемой пробе вычисляют по формуле
(1)
где М2 – масса тары с пробой до высушивания, г;
М3 – масса тары с пробой после высушивания, г;
М1 – масса тары (при определении влаги в корнеклубнеплодах, а также в жидких и пастообразных кормах, масса тары включает и массу кварцевого песка и стеклянной палочки), г;
100 – коэффициент пересчитать в проценты.
За результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.
Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений (daбc)при доверительной вероятности Р = 0,95 не должны превышать следующего значения
d(абс) = 0,05 + 0,24, (2)
где – среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, %.
Допускаемое расхождение между двумя результатами, полученными в разных лабораториях, не должно превышать следующего значения:
Dабс = 0,09 + 0,40, (3)
где – среднее арифметическое результатов двух испытаний, выполненных в разных лабораториях, %.
При проведении анализа пробы в разных лабораториях образец должен храниться в условиях, полностью исключающих потерю влаги.
Предельную погрешность результата анализа (DΣ абс.) при односторонней доверительной вероятности Р = 0,95вычисляют по формуле
DΣ = 0,06 + 0,21. (3)
5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ ВЛАГИ ВЫСУШИВАНИЕМ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 130 °С
Сущность метода заключается в высушивании анализируемой пробы при температуре (130 ± 2) °С в течение 40 мин. Метод распространяется на сено, солому, сенную резку, травяные гранулы и брикеты.
5.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.
5.2 Подготовка к испытанию
5.2.1 Подготовка проб по 4.2.1.
5.3 Проведение испытания
Открытые стеклянные или алюминиевые бюксы с крышками высушивают в сушильном шкафу при температуре (130 ± 2) °С в течение 30 мин, охлаждают в эксикаторе и взвешивают с погрешностью не более 0,001 г. Затем в бюксы помещают навеску испытуемой пробы массой 10,0 – 15,0 г взвешенную с погрешностью не более 0,001 г. Открытые бюксы с пробой и крышками помещают в сушильный шкаф, нагретый до 130 °С, и высушивают при температуре (130 ± 2) °С в течение 40 мин. Затем бюксы вынимают тигельными щипцами из сушильного шкафа, быстро закрывают крышками, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.
5.4 Обработка результатов
Обработку результатов проводят по 4.4.
6 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ ВЛАГИ ВЫСУШИВАНИЕМ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 115 °С
Сущность метода заключается в высушивании анализируемой пробы при температуре (115 ± 2) °С в течение 3 – 4 ч. Метод распространяется на силос, сенаж, зеленые корма, корнеплоды, клубнеплоды.
6.1 Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.
6.2 Подготовка к испытанию
6.2.1 Подготовка проб по 4.2.1.
6.3 Проведение испытания
Фарфоровые чашки высушивают при температуре (115 ± 2) °С в течение 30 мин, охлаждают на лабораторном столе до комнатной температуры и взвешивают с погрешностью не более 0,01 г. Во взвешенные чашки помещают навеску испытуемой пробы массой 40,0 – 50,0 г и высушивают в сушильном шкафу при температуре (115 ± 2) °С в течение 3 – 4 ч. За этот период пробу в чашке 2 – 3 раза перемешивают стеклянной палочкой так, чтобы кусочки пробы не выпадали из чашки. После высушивания пробу охлаждают на лабораторном столе до комнатной температуры и взвешивают.
6.4 Обработка результатов
Обработку результатов проводят по 4.4.
7 ДВУХСТУПЕНЧАТОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ ВЛАГИ
Сущность метода заключается в последовательном определении в пробе сначала первоначальной влаги путем высушивания пробы при температуре 60 °С – 65 °С и доведения до воздушно-сухого состояния, а затем гигроскопической влаги высушиванием воздушно-сухой пробы при температуре (105 ± 2) °С. Массовая доля влаги в испытуемой пробе определяется расчетным путем, исходя из массовой доли первоначальной и гигроскопической влаги.
Метод распространяется на силос, сенаж, зеленые корма, жидкие и пастообразные корма, корнеплоды, клубнеплоды.
7.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.
7.2 Подготовка к испытанию
7.2.1 Подготовка проб по 4.2.1.
7.3 Проведение испытания
7.3.1 Определение первоначальной влаги
Сухую тару (фарфоровые чашки или кюветы) взвешивают на лабораторных весах с погрешностью не более 0,01 г. Во взвешенную тару помешают анализируемую пробу и после взвешивания помещают в сушильный шкаф. Высушивание проводят при температуре 60 °С – 65 °С до воздушно-сухого состояния. Охлаждение пробы проводят на лабораторном столе в течение 1 ч.
Для проверки полноты высушивания чашку с пробой снова ставят в сушильный шкаф на 1 ч. Затем охлаждают на воздухе, как указано выше, и снова взвешивают. Массу считают постоянной, если разница между первым и вторым взвешиванием высушенной и охлажденной пробы не превышает 0,5 % массы высушенной пробы.
Высушенную пробу размалывают, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Остаток на сите измельчают ножницами или в ступке, добавляют к просеянной части и перемешивают.
Пробу хранят в сухом месте в чистой стеклянной или пластмассовой банке с плотно закрывающейся крышкой или пробкой. Масса подготовленной пробы должна быть не менее 150 г.
7.3.2 Определение гигроскопической влаги
Открытые стеклянные или алюминиевые бюксы с крышками высушивают в сушильном шкафу при температуре (105 ± 2) °С в течение 1 ч, затем закрывают крышками, охлаждают в эксикаторе и взвешивают с погрешностью не более 0,001 г. После этого в бюксы помещают навеску размолотой воздушно-сухой пробы массой 2 – 3 г, взвешенную с вышеуказанной погрешностью. Бюксы с пробами помещают в сушильный шкаф, крышки бюксов снимают и ставят рядом или кладут на бюксы ребром. Высушивание проводят при температуре (105 ±2) °С в течение 3 ч. Затем бюксы закрывают крышками, вынимают из шкафа, охлаждают в течение 40 – 50 мин в эксикаторе и взвешивают.
7.4 Обработка результатов
7.4.1 Массовую долю первоначальной влаги в процентах вычисляют по 4.4.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений рассчитывают по 4.4.
7.4.2 Массовую долю гигроскопической влаги в процентах вычисляют по 4.4.
За результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.
7.4.3 Массовую долю общей влаги Х1, %,в испытуемой пробе вычисляют по формуле
где Х3 – массовая доля первоначальной влаги, %;
Х2- массовая доля гигроскопической влаги, %.
8 ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВЛАГИ НА ПРИБОРЕ ВЧМ (ВЛАГОМЕР ЧИЖОВОЙ, МОДЕРНИЗИРОВАННЫЙ)
Сущность метода заключается в высушивании анализируемой пробы при температуре 160 °С во влагомере Чижовой в течение 5 – 10 мин.
Данный экспресс-метод распространяется на зеленую кормовую массу в период заготовки кормов.
8.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Влагомер Чижовой модернизированный.
Листы бумаги размером 16×16 см.
8.2 Подготовка к испытанию
8.2.1 Подготовка проб по 4.2.1.
8.3 Проведение испытания
Берут квадратные листы бумаги размером 16×16 см, перегибают их пополам по диагонали, затем загибают края. Размеры пакета могут быть изменены так, чтобы его края не выходили за пределы прибора. Приготовленный пакет помещают в прибор, разогретый до температуры 160 °С, высушивают в течение 3 мин, охлаждают в эксикаторе и взвешивают с погрешностью не более 0,01 г.
Навеску испытуемой пробы массой 3,0 – 5,0 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, переносят в предварительно высушенный и взвешенный пакет, равномерно распред