Кишечная палочка в кормах для животных
Сбор урожая, производство и дистрибуция кормов и кормовых добавок, максимально сокращающих микробную контаминацию в кормах, а также другие угрозы, связанные с кормовой индустрией, играют важную роль для здоровья животных и человека. Микробные контаминанты – такие, как кишечная палочка (Escherichia coli), сальмонелла (Salmonella), клостридии (Clostridium), стафилококк (Staphylococcus) и стрептококк (Streptococcus), плесневые и дрожжевые грибы в кормах – могут присутствовать в кормах и нести угрозу здоровью и продуктивности животного, и, как следствие, и здоровью человека. Термическая обработка и химические консерванты остаются основными инструментами борьбы с этими угрозами. Хотя разрабатываются и более эффективные методы – в частности, для птицеводства. Finio – новая технология, разработанная компанией Anitox, показывающая многообещающие результаты и высокую эффективность в снижении уровня микробной контаминации и предотвращении повторного загрязнения. Продукты, подобные Finio, способные максимизировать прибыль от инвестиций и при этом улучшать здоровье и продуктивность, позволят индустрии обеспечить экономически эффективные и безопасные кормовые решения.
Роль безопасного корма в поддержании здоровья животного и человека
Быстрый рост городского населения и доходов обеспечивают рост спроса на продукты животного происхождения и, как следствие, на безопасные и качественные корма. Производство безопасных кормов позволяет рационально использовать ресурсы окружающей среды, поскольку повышает производительность животных, сокращает потери корма и улучшает качество продуктов. Качество и безопасность животных кормов имеет непосредственное отношение к здоровью животных, их благополучию и производительности. Кроме того, оно влияет на здоровье производителей кормов, а также на безопасность продовольствия и экологическую устойчивость сельского хозяйства.
Бактерии, плесневые и дрожжевые грибы, токсины могут быть занесены с кормовыми ингредиентами или во время производства, обработки, хранения или транспортировки. Следует использовать все доступные способы сведения к минимуму рисков контаминации корма. Свободное от патогенов производство приобретает все большую популярность сегодня, что повышает спрос на свободные от патогенов и токсинов корма. Кроме того, безопасные корма могут защитить здоровье населения, исключив патогенные факторы, связанные с кормами.
Резистентность к антимикробным веществам у человека, сельскохозяйственных животных и окружающей среды стала одним из основных вопросов мирового уровня, связанным со здоровьем человека (World Health Organization, 2014). Производство безопасных кормов позволяет минимизировать зависимость от кормовых антибиотиков.
Угрозы, связанные с кормами
Микробное загрязнение кормов имеет сильное влияние на здоровье продуктивных животных и их производительность. Среди основных микробных контаминантов – кишечная палочка (Escherichia coli), сальмонелла (Salmonella), клостридии (Clostridium), стафилококк (Staphylococcus) и стрептококк (Streptococcus). Например, некротический энтерит бройлеров, причиной которого может стать энтеритная клостридия типа A или C, может снизить конверсию корма и темпы привесов. Микробные токсины могут повредить тонкий кишечник и повысить риск смертности. Данное заболевание раньше контролировалось профилактическим применением противомикробных препаратов, теперь для его контроля следует оптимизировать кормление – состав кормов, уровень микробной контаминации кормов и другие аспекты кормления.
Сальмонелла в кормах для животных является частым источником инфекционных заболеваний у животных (Jones, 2011). Сальмонелла энтерика может переноситься из животного корма в организм животных и пищу людей, поэтому является в большей степени угрозой общественного здоровья. Кормовые ингредиенты, особенно белковые шроты животного и растительного происхождения, часто заражены сальмонеллой (Wierup and Häggblom, 2010). Источником часто становится перерабатывающий завод или повторное загрязнение на кормозаводах, и это является дополнительной проблемой. Важность отсутствия сальмонеллы в кормах очень высока, поскольку однодневные цыплята очень чувствительны к ней. Для борьбы с такого рода загрязнением кормов применяется химическая обработка, включая обработку органическими кислотами и их солями, формальдегидами. (Wales et al., 2010).
Методы борьбы с патогенами в кормах
Производство безопасных кормов включает методы, предотвращающие загрязнение кормовых ингредиентов и/или кормов, потенциальный рост уровня патогенов, а также позволяющие уничтожить или сдержать патогены или токсины. Поскольку угрозы могут встречаться на разных этапах производства и транспортировки кормов на ферму, продукты должны обеспечивать безопасность на всех возможных звеньях кормовой цепочки. Борьба с контаминантами не только минимизирует бактериальное загрязнение, но также устраняет производящие токсины грибки и дрожжевые грибки, что благотворно сказывается на здоровье и продуктивности животных и позволяет сократить применение антимикробных препаратов.
Формальдегид давно считается одним из самых эффективных методов борьбы с патогенами в кормах, его использование недавно было повторно изучено Европейским агентством по безопасности продуктов питания/European Food Safety Agency (EFSA Opinion, 2014). Формальдегид одобрен как вещество, препятствующее размножению бактерий всех типов при уровне загрязнения от 1,0 – 5,0 кг/тонну корма. Группа ученых EFSA пришла к выводу, что правильное использование формальдегида в кормопроизводстве не несет опасности потребителю или окружающей среде (EFSA Opinion, 2014). При этом стоит сказать об опасном производственном факторе, возникающем в случае, если формальдегид неправильно утилизируется. Также существует мнение, что использование органических кислот и формальдегида в кормопроизводстве может «замаскировать» присутствие сальмонеллы. Carrique-Mas (2007) отметил, что вероятность «маскировки» сальмонеллы значительно выше при использовании органических кислот, в отличие от формальдегида.
Термическая обработка обычно используется во время кондиционирования, гранулирования или экструдирования корма и считается эффективным способом борьбы с микробами в кормовых компонентах или комбикормах. Нагревание корма до 80 – 85 ˚C на 1 минуту может уничтожить сальмонеллу (Jones and Richardson, 2004). При этом этот процесс зависит от уровня контаминации и выбранной температуры. Тепловая обработка более чем на 30 секунд до 75 ˚C позволяет сократить заражение сальмонеллой до 3 log (Berge and Wierup, 2012). Термическая обработка – эффективный способ борьбы с патогенами в кормах, его применяют во многих программах, направленных на борьбу с сальмонеллой, особенно в скандинавских странах. При этом данный способ не имеет остаточной активности, а также не предотвращает повторного загрязнения. Он также может разрушить питательные вещества и ферменты.
Органические кислоты – такие как муравьиная, молочная, уксусная, дубильная, фумаровая, пропионовая, каприловая и т.д. – используются для сдерживания размножения бактерий в кормах. Их часто используют в комбинации с термической обработкой.
Другие добавки. Наряду с добавками, призванными снизить микробиологическую нагрузку в кормах, существуют разные добавки для улучшения производительности и здоровья сельскохозяйственных животных, уничтожения опасных для животных и человека патогенов. Использование пребиотиков и пробиотиков для предотвращения дисбиоза у животных имеет очень переменные результаты и не способно сохранить здоровье кишечника (Ducatelle et al., 2015). Эффективность кормовых добавок, контролирующих наличие сальмонеллы, часто сомнительна, если этот метод применяется в комбинации с каким-то еще (Berge and Wierup, 2012; Totton et al., 2012). Мета-анализ на основе 70 исследований, посвященных применению различных добавок, пребиотиков (фруктоолигосахарид, лактоза, сыворотка, сухое молоко, лактулоза, лактосукроза, сахароза, мальтоза, маннан-олигосахариды), лактозы и экспериментальных хлоратных продуктов в бройлерном производстве, также показал, что борьба с распространением сальмонеллы не всегда эффективна (Totton et al., 2012). Существует также множество других добавок, таких, как ферменты (Kiarie et al., 2013), эфирные масла, короткоцепочечные жирные кислоты. Но результаты их применения часто непредсказуемы, или они имеют ограниченную эффективность, поэтому поиск методов производства безопасных кормов по-прежнему актуален. Одной из новых технологий в кормовой индустрии является продукт Finio, принадлежащий компании Anitox. Это многообещающая альтернатива термической обработке и органическим кислотам, позволяющая эффективно контролировать патогенные микроорганизмы в кормах.
Мнение редакции может не совпадать с мнением автора
Источник
ГОСТ 31878-2012
Группа С19
МКС 65.120
Дата введения 2014-01-01
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 “Межгосударственная система стандартизации. Основные положения” и ГОСТ 1.2-2009 “Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены”
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом “Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации” (ОАО “ВНИИС”)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 3 декабря 2012 г. N 54-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны | Код страны | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Кыргызстан | KG | Кыргызстандарт |
Российская Федерация | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
Украина | UA | Госпотребстандарт Украины |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1847-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31878-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.
5 Настоящий стандарт соответствует международному стандарту ISO 4831:2006* Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the detection and enumeration of coliforms – Most probable number technique (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения и подсчета колиформных бактерий. Методика наиболее вероятного числа)
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. – Примечание изготовителя базы данных.
Степень соответствия – неэквивалентная (NEQ).
Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53985-2010
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в ежемесячно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”, а текст изменений и поправок – в ежемесячно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”. В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в ежемесячно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на корма для животных и устанавливает метод обнаружения и подсчета наиболее вероятного числа (НВЧ) бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий).
Метод наиболее вероятного числа колиформных бактерий предназначен для кормов, содержащих искомое количество микроорганизмов в диапазоне от 1 до 100 на миллилитр или грамм анализируемой пробы.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ ISO 11133-1-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культурных сред в лаборатории
ГОСТ ISO 11133-2-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011, здесь и далее по тексту. – Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 25311-82 Мука кормовая животного происхождения. Методы бактериологического анализа
ГОСТ 29227-91 (ISO 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31747-2012 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю “Национальные стандарты”, составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины и определения по ГОСТ 31747.
4 Обнаружение колиформных бактерий и определение количества методом наиболее вероятного числа (НВЧ)
Сущность метода – по ГОСТ 31747.
4.1 Метод обнаружения колиформных бактерий
4.1.1 В пробирку с селективно обогащенной питательной средой вносят около 1 г корма, пробирку помещают в термостат для инкубирования при температуре 30 °С или 37 °С (по договоренности) в течение 24 ч или 48 ч.
4.1.2 Пробирку после выращивания по 4.1.1 проверяют на наличие помутнения и/или образования газа. Затем из пробирки, в которой установлено наличие помутнения и/или образования газа, вносят в другую пробирку с селективно обогащенной питательной средой около 1 см суспензии и проводят повторное выращивание микроорганизмов при температуре 30 °С или 37 °С (по договоренности) в течение 24 ч или 48 ч.
4.1.3 Присутствие колиформных бактерий подтверждают в случае, если помутнение и/или образование газа замечено после осмотра пробирки, полученной по 4.1.2.
4.2 Метод НВЧ – определение количества колиформных бактерий
4.2.1 В три пробирки с селективно обогащенной жидкой питательной средой двойной концентрации вводят определенное количество анализируемой пробы, если исходный корм является жидким, или определенное количество исходной суспензии в случае испытания других кормов.
4.2.2 В три пробирки с селективно обогащенной жидкой питательной средой нормальной концентрации вводят определенное количество анализируемой пробы, если исходный корм является жидким, или определенное количество исходной суспензии в случае испытания других кормов.
Затем, в таких же условиях, в дополнительные пробирки с питательной средой нормальной концентрации вводят десятикратные разведения анализируемой пробы или исходной суспензии.
4.2.3 Пробирки с посевами, содержащие селективно обогащенную питательную среду двойной концентрации, выращивают при температуре 30 °C или 37 °C (по договоренности) в течение 24 ч, а пробирки, содержащие селективно обогащенную питательную среду нормальной концентрации, инкубируют 24 ч или 48 ч и после этого пробирки осматривают и отмечают образование пузырьков газа или помутнение, затрудняющее учет газообразования.
4.2.4 В ряд пробирок с подтверждающей питательной средой вводят суспензию культур из пробирок с селективно обогащенной питательной средой двойной концентрации и суспензию культур из пробирок с селективно обогащенной питательной средой нормальной концентрации, в которых было замечено образование пузырьков газа или помутнение.
4.2.5 Посевы в пробирках по 4.2.4 выращивают при температуре 30 °C или 37 °C в течение 24 ч или 48 ч и эти пробирки исследуют на формирование газа.
4.2.6 Наиболее вероятное число колиформных бактерий в 1 см или 1 г пробы корма (НВЧ) рассчитывают исходя из числа пробирок по 4.2.5, показывающих формирование газа. В этом случае используют таблицу установления наиболее вероятного числа.
5 Питательные среды и разбавители
5.1 Общие положения
Качество подготовки, изготовления и оценки эффективности питательных сред для выращивания бактерий – по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.
5.2 Селективно обогащенная питательная среда: LST (Триптоза лаурилсульфата)
5.2.1 Состав приведен в таблице 1.
Таблица 1
Наименование компонента | а) | b) |
Энзиматический гидролизат молока и животных протеинов, г | 40 | 20 |
Лактоза , г | 10 | 5 |
Дикалия гидрофосфат , г | 5,5 | 2,75 |
Калия дигидрофосфат , г | 5,5 | 2,75 |
Хлорид натрия, г | 10 | 5 |
Лаурилсульфат натрия, г | 0,2 | 0,1 |
Вода, см | 1000 | 1000 |
5.2.2 Приготовление
Различные компоненты или сухую питательную среду растворяют при нагреве в воде.
При необходимости корректируют pH так, чтобы после стерилизации он был равен 6,8±0,2 ед. pH при температуре 25 °C.
Питательную среду разливают по 10 см в пробирки Дархама (поплавки) размером приблизительно 16 мм160 мм, когда используют среду нормальной концентрации, и в пробирки с размерами приблизительно 20 мм200 мм (не содержащие поплавки), когда используют среду двойной концентрации.
Стерилизуют среду в автоклаве при температуре (121±1) °C в течение 15 мин. Пробирки Дархама не должны содержать воздушные пузырьки после стерилизации.
5.2.3 Тестирование эффективности для обеспечения качества питательной среды
Определение селективности и продуктивности – по ГОСТ ISO 11133-1. Тестирование эффективности питательной среды LST (бульон триптоза лаурилсульфата) – по ГОСТ ISO 11133-2 (таблица B.1).
5.3 Подтверждающая среда: лактозный желчный бульон с бриллиантовым зеленым
5.3.1 Состав приведен в таблице 2.
Таблица 2
Ферментативный перевар казеина, г | 10 |
Лактоза , г | 10 |
Обезвоженная желчь быка, г | 20 |
Бриллиантовый зеленый (краситель), г | 0,0133 |
Вода, см | 1000 |
5.3.2 Приготовление
Различные компоненты или сухую питательную среду растворяют при нагреве в воде.
При необходимости корректируют pH так, чтобы после стерилизации он был равен 7,2±0,2 ед. pH при температуре 25 °C.
Разливают и стерилизуют среду по 5.2.2.
5.3.3 Тестирование эффективности для обеспечения качества питательной среды
Определение селективности и продуктивности лактозного желчного бульона с бриллиантовым зеленым – по ГОСТ ISO 11133-2 (таблица B.1).
6 Оборудование и стеклянная посуда
Используют обычное оборудование микробиологической лаборатории по ГОСТ ISO 7218.
6.1 Оборудование для сухой (сушильный шкаф) или влажной стерилизации (автоклав).
6.2 Термостат, способный поддерживать температуру на уровне (30±1) °C или (37±1) °C.
6.3 Петля, изготовленная из платино-иридиевого или хромоникелевого сплава, диаметром приблизительно 3 мм, или петли одноразового пользования.
6.4 Пробирки, имеющие размеры приблизительно 16 мм160 мм и 20 мм200 мм.
6.5 Пробирки Дархама, с размерами, пригодными для использования в пробирках с размерами 16 мм160 мм (6.4).
6.6 Пипетки градуированные вместимостью 1 см и 10 см по ГОСТ 29227.
6.7 pH-метр с диапазоном измерений рН от 2 до 18, погрешность измерений ±0,01 ед. рН при температуре 25 °C.
7 Отбор проб
Отбор проб следует осуществлять в соответствии с нормативным документом, подходящим для конкретного корма.
8 Приготовление анализируемой пробы
Анализируемую пробу подготавливают по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 25311 или по другим нормативным документам стран, присоединившихся к стандарту.
9 Проведение испытания (см. приложение A)
9.1 Метод обнаружения (см. приложение А, рисунок A.1)
9.1.1 Подготовка анализируемой пробы и исходной суспензии
Подготовка анализируемой пробы – по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 25311 или по другим нормативным документам стран, присоединившихся к стандарту, подходящим для конкретного корма.
9.1.2 Методика посева на питательные среды
9.1.2.1 В зависимости от требуемого предела обнаружения, см анализируемой пробы, если она представляет жидкий корм, или см исходной суспензии в случае исследования других кормов, переносят в пробирку, содержащую 10 см селективно обогащенной питательной среды двойной концентрации [5.2.1, a)], когда 1 см10 см, или в пробирку, содержащую 10 см селективно обогащенной питательной среды нормальной концентрации [5.2.1, b)], когда 1 см.
9.1.2.2 Пробирку с питательной средой двойной концентрации (9.1.2.1) выдерживают в термостате (6.2), установленном на температуру 30 °C или 37 °C (по договоренности), в течение (24±2) ч.
9.1.2.3 Пробирку с питательной средой нормальной концентрации (9.1.2.1) выдерживают в термостате (6.2), установленном на температуру 30 °C или 37 °C (по договоренности) в течение (24±2) ч или, если на данной стадии не наблюдается ни образование пузырьков газа, ни помутнение, затрудняющее учет газообразования, период инкубации продлевают еще на (24±2) ч.
9.1.3 Подтверждение (см. приложение А, рисунок A.3)
9.1.3.1 Из пробирки, прошедшей инкубацию согласно 9.1.2.2, петлей (6.3) берут суспензию и вводят ее в пробирку с подтверждающей питательной средой (5.3). Выдерживают в термостате (6.2), установленном на температуру 30 °C или 37 °C (по договоренности) в течение (24±2) ч, или, если на этой стадии образование пузырьков газа не наблюдается, в течение (48±2) ч.
9.1.3.2 Аналогичную процедуру (описание которой дано в 9.1.3.1) выполняют для пробирок, прошедших инкубацию согласно 9.1.2.3 и показывающих образование пузырьков газа или помутнение, затрудняющее учет газообразования, когда один из этих двух признаков наблюдается впервые, то есть через (24±2) ч или (48±2) ч.
9.1.4 Интерпретация (см. приложение А, рисунок A.1)
Пробирки по 9.1.3.1 или 9.1.3.2, в которых наблюдается образование пузырьков газа через (24±2) ч или (48±2) ч, оценивают как дающие положительный результат.
9.2 Метод определения наиболее вероятного числа колиформов (см. приложение А, рисунок A.2)
9.2.1 Подготовка анализируемой пробы, исходной суспензии и разбавление
Подготовка анализируемой пробы, исходной суспензии и разбавление – по нормативным документам стран, присоединившихся к стандарту, подходящим для исследуемого корма. Приготовляют достаточное число разбавлений, чтобы гарантировать, что все пробирки, соответствующие конечному разбавлению, дадут отрицательный результат (отсутствие помутнения).
9.2.2 Инокуляция и инкубация
9.2.2.1 Берут три пробирки для каждой серии разбавлений. Допускается для некоторых кормов и/или всякий раз, когда требуются результаты более высокой точности, инокуляция большего числа пробирок (например, пяти вместо трех). В этих случаях, для вычисления методом наиболее вероятного числа следует обратиться к соответствующим таблицам в ГОСТ ISO 7218.
9.2.2.2 Берут три пробирки с селективно обогащенной питательной средой двойной концентрации [5.2.1, a)]. Используя стерильную пипетку, переносят в каждую из трех пробирок по 10 см анализируемой пробы, если исследуемый корм жидкий, или по 10 см исходной суспензии в случае исследования других кормов.
9.2.2.3 Затем берут три пробирки с селективно обогащенной питательной средой нормальной концентрации [5.2.1, b)]. Используя стерильную пипетку, переносят в каждую из трех пробирок по 1 см анализируемой пробы, если исследуемый корм жидкий, или по 1 см исходной суспензии в случае исследования других кормов.
9.2.2.4 Для каждого из последующих разбавлений продолжают действия согласно описанию в 9.2.2.3. Используют свежую стерильную пипетку для каждого разбавления. Введенную суспензию и питательную среду тщательно перемешивают.
9.2.2.5 Пробирки с питательной средой двойной концентрации (9.2.2.2) выдерживают в термостате при температуре 30 °C или 37 °C в течение (24±2) ч.
9.2.2.6 Пробирки с питательной средой нормальной концентрации (9.2.2.3 и 9.2.2.4) выдерживают в термостате при температуре 30 °C или 37 °C в течение (24±2) ч, или, если на этой стадии не обнаруживается ни образование пузырьков газа, ни помутнение, затрудняющее учет газообразования, инкубацию продолжают дополнительно в течение (24±2) ч.
9.2.3 Подтверждение (см. приложение А, рисунок A.3)
9.2.3.1 Из каждой пробирки, прошедшей инкубацию согласно 9.2.2.5, петлей берут суспензию и вводят ее в пробирку с подтверждающей питательной средой (5.3). Выдерживают в термостате (6.2), установленном на температуру 30 °C или 37 °C (по договоренности) в течение (24±2) ч, или, если на этой стадии образование пузырьков газа не наблюдается, инкубацию продолжают дополнительно в течение (24±2) ч.
9.2.3.2 Процедуру, описанную в 9.2.3.1, выполняют с пробирками, прошедшими инкубацию согласно 9.2.2.6 и показывающими образование пузырьков газа или помутнение, затрудняющее учет газообразования, когда один из этих двух признаков наблюдается впервые, т.е. через (24±2) ч или (48±2) ч.
9.2.4 Интерпретация (см. приложение А, рисунок A.2)
Для каждого разбавления подсчитывают общее количество пробирок, в которых подтверждается образование пузырьков газа согласно 9.2.3 (положительные пробирки) через (24±2) ч или (48±2) ч (если инкубация продлевалась еще на сутки).
10 Обработка результатов
В соответствии с результатами интерпретации (см. 9.1.4) указывают присутствие или отсутствие колиформных бактерий в анализируемой пробе корма по ГОСТ ISO 7218.
Вычисляют наиболее вероятное число из количества положительных пробирок на каждой стадии разбавления по ГОСТ ISO 7218.
11 Сходимость результатов исследования
Установлено, что при использовании метода наиболее вероятного числа (НВЧ) может иметь место значительный разброс результатов. Доверительные пределы приведены в ГОСТ ISO 7218.
12 Требования безопасности
Требования безопасности выполнения работ и квалификации оператора – по ГОСТ ISO 7218.
Приложение A (обязательное).
Приложение A
(обязательное)
А.1 Блок-схема метода обнаружения бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) представлена на рисунке А.1.
Рисунок.А.1. Блок-схема метода обнаружения бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Рисунок A.1
Рисунок А.2. Схема метода подсчета бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
А.2 Схема метода подсчета бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) представлена на рисунке А.2.
Рисунок A.2
Рисунок A.3. Схема стадий подтверждения обнаружения бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
А.3 Схема стадий подтверждения обнаружения бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) представлена на рисунке А.3.
Рисунок A.3
Электронный текст документа
подготовлен ЗАО “Кодекс” и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2013
Источник