Методика бактериологические исследования кормов на энтерококки
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель начальника
Главного управления ветеринарии Л.П.Маланин 21 марта 1986 год
________________
*
Методика бактериологического исследования кормов на энтерококки
разработана Всесоюзным научно-исследовательским институтом
ветеринарной санитарии и Центральной ветеринарной лабораторией
Главветупра Госагропрома СССР
1.
Общие положения
1.1. Бактериологическое
исследование кормов на обнаружение энтерококков проводят для
уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний
сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).
1.2. Метод основан на
двухэтапном посеве на ингибирующие среды, подавляющие рост
грамотрицательных и частично грамположительных микробов.
1.3. Пробы корма
отбираются согласно общепринятым методам.
2.
Проведение исследований
2.1. В колбу с 450 мл
стерильного физиологического раствора помещают 50 г корма
(разведение 1:10), тщательно встряхивают на шуттель-аппарате 30
минут. Из полученной взвеси готовят последовательные разведения
1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в
пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы
инкубируют в термостате при 37° в течение 16-24 часов.
2.2. Из пробирок с
измененным цветом среды в зеленый или желтый делают посев на
плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в
бактериологических чашках. Посевы инкубируют в термостате при 37° в
течение 24-48 часов.
2.3. Через 24-48 часов
изучают рост колоний на среде МИС, идентифицируя разные виды и
варианты энтерококков: Str. faecalis и его варианты образуют
на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными краями,
черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var.
liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг
колоний зону просветления с ободком помутнения по ее периферии.
Str. faecium на среде МИС растет в виде мелких, сероватых,
иногда почти бесцветных колоний.
2.4. У выделенных культур
со среды МИС определяют морфологические и
культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных
дифференциальных признаков энтерококков и сходных с ними
микроорганизмов.
2.5. Патогенные свойства
энтерококков определяют биологической пробой на белах мышах. Для
этого заражают внутрибрюшинно трех мышей массой 18-20 г в дозе 0,5
см суспензией суточной культуры со скошенного
МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по оптическому
стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии
необходимой концентрации используют физиологический раствор.
Патогенные культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в
первые 3-е суток после заражения. Наблюдение за подопытными
животными ведут в течение 5 суток.
3.
Ветеринарно-санитарная оценка кормов
3.1. Корма, в которых
обнаружены патогенные энтерококки, запрещается использовать без
термической обработки. Их подвергают проварке при температуре не
ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими Правилами
бактериологического исследования кормов.
Приложение 1. Рецепты питательных сред
Приложение 1
к методике бактериологического
исследования кормов на энтерококки
1. Щелочно-полимиксиновая
среда
Раздельно готовят:
среду А: МПБ – 280 мл,
хлорид натрия – 4,0 г, глюкоза – 8,0 г, дрожжевой экстракт – 16
мл.
раствор Б: натрий
углекислый (NaCO) – 4,4, дистиллированная вода – 50 мл.
раствор В: калий
двузамещенный фосфорнокислый (KHPО) – 2,0, дистиллированная вода – 50 мл.
Среду А, растворы Б и В
стерилизуют при …..*,5 атм. 12-15 минут.
________________
*
Брак оригинала. – Примечание изготовителя базы данных.
Источник
МЕТОДИКА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
КОРМОВ НА ЭНТЕРОКОККИ
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель
начальника
Главного
управления ветеринарии
_________________
Л.П. Маланин
21 марта 1986 год
Методика бактериологического
исследования кормов на энтерококки разработана Всесоюзным
научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии и Центральной
ветеринарной лабораторией Главветупра Госагропрома СССР
1.1. Бактериологическое исследование кормов на обнаружение
энтерококков проводят для уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний
сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).
1.2. Метод основан на двухэтапном посеве на ингибирующие
среды, подавляющие рост грамотрицательных и частично грамположительных микробов.
1.3. Пробы корма отбираются согласно общепринятым методам.
2.1. В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора
помещают 50 г корма (разведение 1:10), тщательно встряхивают на
шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные
разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в
пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение
16 – 24 часов.
2.2. Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или
желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в бактериологических чашках.
Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 – 48 часов.
2.3. Через 24 – 48 часов изучают рост колоний на среде МИС,
идентифицируя разные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его
варианты образуют на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными
краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var.
liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг колоний зону
просветления с ободком помутнения по ее периферии. Str. faecium на среде
МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.
2.4. У выделенных культур со среды МИС определяют
морфологические и культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных дифференциальных признаков
энтерококков и сходных с ними микроорганизмов.
2.5. Патогенные свойства энтерококков определяют
биологической пробой на белах мышах. Для этого заражают внутрибрюшинно трех
мышей массой 18 – 20 г в дозе 0,5 см3 суспензией суточной культуры
со скошенного МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по
оптическому стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии
необходимой концентрации используют физиологический раствор. Патогенные
культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в первые 3-е суток после
заражения. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 суток.
3.1. Корма, в которых обнаружены патогенные энтерококки,
запрещается использовать без термической обработки. Их подвергают проварке при
температуре не ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими
Правилами бактериологического исследования кормов.
Рецепты питательных сред
1. Щелочно-полимиксиновая среда
Раздельно готовят:
среду А: МПБ – 280 мл, хлорид натрия – 4,0 г, глюкоза – 8,0
г, дрожжевой экстракт – 16 мл.
раствор Б: натрий углекислый (Na2CO3) – 4,4, дистиллированная вода – 50 мл.
раствор В: калий двузамещенный фосфорнокислый (K2НРO4) – 2,0,
дистиллированная вода – 50 мл.
Среду А, растворы Б и В стерилизуют при 5 атм. 12 – 15
минут.
После стерилизации их смешивают и добавляют 1,6 мл 1,6
%-ного щелочного раствора бромтимолблау (1,6 г бромтимолблау растворяют в 33 мл
0,4 %-ного раствора едкого натра и объем доводят до 100 мл дистиллированной водой)
и 200000 ЕД полимиксина.
Среду разливают по 5 мл в пробирки. Хранят в холодильнике 7
– 10 дней.
2. Молочно-ингибиторная среда (МИС)
К 850 мл стерильного 2 %-ного МПА (при температуре не более
55°) добавляют 150 мл стерильного снятого молока, 12,5 мл 0,01 %-ного водного
раствора кристаллического фиолетового (ингибитор), 10 мл 2 %-ного водного
раствора теллурата калия, смешивают и разливают в чашки Петри.
3. Дрожжевой экстракт
250 г прессованных пекарских (свежих) дрожжей растворяют в
500 мл дистиллированной воды и автоклавируют текучим паром 30 минут. После
остывания помещают в холодильник для отстаивания (на 4 – 5 суток), затем
надосадочную жидкость сливают в стеклянную посуду. К этой жидкости добавляют
1,25 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на
100 мл и стерилизуют текучим паром 20 – 30 минут. Хранят в холодильнике 1
месяц.
Таблица 1
Дифференциальные
признаки энтерококков и сходных с ними микроорганизмов
Виды и варианты | Редукция теллурита калия | Ферментация | Ассимиляция цитратов | Гидролиз желатина | Кровяной агар | ||
сорбита | маннита | арабинозы | |||||
Str. | + | ± | + | + | – | – | |
Str. faecalis var. liquefaciens | + | ± | + | + | + | – | |
Str. faecalis var. xymogenes | + | ± | + | + | ± | + | |
Str. faecium | – | + | + | – | – | – | |
Str. durans | – | – | – | – | – | – | ± |
Str. | + | – | – | ± | – | – | – |
Str. | – | – | – | – | – | – | – |
СОДЕРЖАНИЕ
Источник
МЕТОДИКА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
КОРМОВ НА ЭНТЕРОКОККИ
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель начальника
Главного управления ветеринарии
_________________ Л.П. Маланин
21 марта 1986 год
Методика бактериологического исследования кормов на энтерококки разработана Всесоюзным научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии и Центральной ветеринарной лабораторией Главветупра Госагропрома СССР
1. Общие положения
1.1. Бактериологическое исследование кормов на обнаружение энтерококков проводят для уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).
1.2. Метод основан на двухэтапном посеве на ингибирующие среды, подавляющие рост грамотрицательных и частично грамположительных микробов.
1.3. Пробы корма отбираются согласно общепринятым методам.
2. Проведение исследований
2.1. В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора помещают 50 г корма (разведение 1:10), тщательно встряхивают на шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 16 – 24 часов.
2.2. Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в бактериологических чашках. Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 – 48 часов.
2.3. Через 24 – 48 часов изучают рост колоний на среде МИС, идентифицируя разные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его варианты образуют на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var. liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг колоний зону просветления с ободком помутнения по ее периферии. Str. faecium на среде МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.
2.4. У выделенных культур со среды МИС определяют морфологические и культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных дифференциальных признаков энтерококков и сходных с ними микроорганизмов.
2.5. Патогенные свойства энтерококков определяют биологической пробой на белах мышах. Для этого заражают внутрибрюшинно трех мышей массой 18 – 20 г в дозе 0,5 см3 суспензией суточной культуры со скошенного МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по оптическому стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии необходимой концентрации используют физиологический раствор. Патогенные культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в первые 3-е суток после заражения. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 суток.
3. Ветеринарно-санитарная оценка кормов
3.1. Корма, в которых обнаружены патогенные энтерококки, запрещается использовать без термической обработки. Их подвергают проварке при температуре не ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими Правилами бактериологического исследования кормов.
Приложение 1
Рецепты питательных сред
1. Щелочно-полимиксиновая среда
Раздельно готовят:
среду А: МПБ – 280 мл, хлорид натрия – 4,0 г, глюкоза – 8,0 г, дрожжевой экстракт – 16 мл.
раствор Б: натрий углекислый (Na2CO3) – 4,4, дистиллированная вода – 50 мл.
раствор В: калий двузамещенный фосфорнокислый (K2НРO4) – 2,0, дистиллированная вода – 50 мл.
Среду А, растворы Б и В стерилизуют при 5 атм. 12 – 15 минут.
После стерилизации их смешивают и добавляют 1,6 мл 1,6 %-ного щелочного раствора бромтимолблау (1,6 г бромтимолблау растворяют в 33 мл 0,4 %-ного раствора едкого натра и объем доводят до 100 мл дистиллированной водой) и 200000 ЕД полимиксина.
Среду разливают по 5 мл в пробирки. Хранят в холодильнике 7 – 10 дней.
2. Молочно-ингибиторная среда (МИС)
К 850 мл стерильного 2 %-ного МПА (при температуре не более 55°) добавляют 150 мл стерильного снятого молока, 12,5 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового (ингибитор), 10 мл 2 %-ного водного раствора теллурата калия, смешивают и разливают в чашки Петри.
3. Дрожжевой экстракт
250 г прессованных пекарских (свежих) дрожжей растворяют в 500 мл дистиллированной воды и автоклавируют текучим паром 30 минут. После остывания помещают в холодильник для отстаивания (на 4 – 5 суток), затем надосадочную жидкость сливают в стеклянную посуду. К этой жидкости добавляют 1,25 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на 100 мл и стерилизуют текучим паром 20 – 30 минут. Хранят в холодильнике 1 месяц.
Таблица 1
Дифференциальные признаки энтерококков и сходных с ними микроорганизмов
Виды и варианты | Редукция теллурита калия | Ферментация | Ассимиляция цитратов | Гидролиз желатина | Кровяной агар | ||
сорбита | маннита | арабинозы | |||||
Str. faecalis | + | ± | + | + | – | – | |
Str. faecalis var. liquefaciens | + | ± | + | + | + | – | |
Str. faecalis var. xymogenes | + | ± | + | + | ± | + | |
Str. faecium | – | + | + | – | – | – | |
Str. durans | – | – | – | – | – | – | ± |
Str. bovis | + | – | – | ± | – | – | – |
Str. equinus | – | – | – | – | – | – | – |
СОДЕРЖАНИЕ
Источник
МЕТОДИКА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
КОРМОВ НА ЭНТЕРОКОККИ
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель
начальника
Главного
управления ветеринарии
_________________
Л.П. Маланин
21 марта 1986 год
Методика бактериологического
исследования кормов на энтерококки разработана Всесоюзным
научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии и Центральной
ветеринарной лабораторией Главветупра Госагропрома СССР
1.1. Бактериологическое исследование кормов на обнаружение
энтерококков проводят для уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний
сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).
1.2. Метод основан на двухэтапном посеве на ингибирующие
среды, подавляющие рост грамотрицательных и частично грамположительных микробов.
1.3. Пробы корма отбираются согласно общепринятым методам.
2.1. В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора
помещают 50 г корма (разведение 1:10), тщательно встряхивают на
шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные
разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в
пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение
16 – 24 часов.
2.2. Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или
желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в бактериологических чашках.
Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 – 48 часов.
2.3. Через 24 – 48 часов изучают рост колоний на среде МИС,
идентифицируя разные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его
варианты образуют на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными
краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var.
liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг колоний зону
просветления с ободком помутнения по ее периферии. Str. faecium на среде
МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.
2.4. У выделенных культур со среды МИС определяют
морфологические и культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных дифференциальных признаков
энтерококков и сходных с ними микроорганизмов.
2.5. Патогенные свойства энтерококков определяют
биологической пробой на белах мышах. Для этого заражают внутрибрюшинно трех
мышей массой 18 – 20 г в дозе 0,5 см3 суспензией суточной культуры
со скошенного МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по
оптическому стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии
необходимой концентрации используют физиологический раствор. Патогенные
культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в первые 3-е суток после
заражения. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 суток.
3.1. Корма, в которых обнаружены патогенные энтерококки,
запрещается использовать без термической обработки. Их подвергают проварке при
температуре не ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими
Правилами бактериологического исследования кормов.
Рецепты питательных сред
1. Щелочно-полимиксиновая среда
Раздельно готовят:
среду А: МПБ – 280 мл, хлорид натрия – 4,0 г, глюкоза – 8,0
г, дрожжевой экстракт – 16 мл.
раствор Б: натрий углекислый (Na2CO3) – 4,4, дистиллированная вода – 50 мл.
раствор В: калий двузамещенный фосфорнокислый (K2НРO4) – 2,0,
дистиллированная вода – 50 мл.
Среду А, растворы Б и В стерилизуют при 5 атм. 12 – 15
минут.
После стерилизации их смешивают и добавляют 1,6 мл 1,6
%-ного щелочного раствора бромтимолблау (1,6 г бромтимолблау растворяют в 33 мл
0,4 %-ного раствора едкого натра и объем доводят до 100 мл дистиллированной водой)
и 200000 ЕД полимиксина.
Среду разливают по 5 мл в пробирки. Хранят в холодильнике 7
– 10 дней.
2. Молочно-ингибиторная среда (МИС)
К 850 мл стерильного 2 %-ного МПА (при температуре не более
55°) добавляют 150 мл стерильного снятого молока, 12,5 мл 0,01 %-ного водного
раствора кристаллического фиолетового (ингибитор), 10 мл 2 %-ного водного
раствора теллурата калия, смешивают и разливают в чашки Петри.
3. Дрожжевой экстракт
250 г прессованных пекарских (свежих) дрожжей растворяют в
500 мл дистиллированной воды и автоклавируют текучим паром 30 минут. После
остывания помещают в холодильник для отстаивания (на 4 – 5 суток), затем
надосадочную жидкость сливают в стеклянную посуду. К этой жидкости добавляют
1,25 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на
100 мл и стерилизуют текучим паром 20 – 30 минут. Хранят в холодильнике 1
месяц.
Таблица 1
Дифференциальные
признаки энтерококков и сходных с ними микроорганизмов
Виды и варианты | Редукция теллурита калия | Ферментация | Ассимиляция цитратов | Гидролиз желатина | Кровяной агар | ||
сорбита | маннита | арабинозы | |||||
Str. | + | ± | + | + | – | – | |
Str. faecalis var. liquefaciens | + | ± | + | + | + | – | |
Str. faecalis var. xymogenes | + | ± | + | + | ± | + | |
Str. faecium | – | + | + | – | – | – | |
Str. durans | – | – | – | – | – | – | ± |
Str. | + | – | – | ± | – | – | – |
Str. | – | – | – | – | – | – | – |
СОДЕРЖАНИЕ
Источник